کلون، بیان و تخلیص پروتئین p۶۴۷-۱۵۳هموفیلوس آنفلوانزا
نویسندگان
چکیده
زمینه و هدف: همـوفیلوس آنفلوانزا، باسیل گرم منفی است که بخشی از میکروفلور نازوفارنکس را در اغلب افراد تشکیل داده و سویه های مختلف آن در دو گروه کپسولدار (قابل طبقه بندی) و بدون کپسول (غیرقابل طبقه بندی) مورد مطالعه قرار میگیرد. پروتئین غشاء خارجی p6 ، نوعی ایمونوژن حفاظت شده و پایدار درمیان سویههای فاقد کپسول و نیز سویههای کپسولدار هموفیلوس آنفلوانزا میباشد و خود بعنوان کاندید مناسبی جهت واکسیناسیون علیه هموفیلوس آنفلوانزا مطرح گردیده است. هدف از این مطالعه، تولید و تخلیص آنتیژن نوترکیب p6 به عنوان یک پروتئین حامل در واکسنهای کونژوگه میباشد. روش کار: قطعهای به طول324 جفت باز از بخش انتهای ژن کد کننده پروتئین p6 در حامل پلاسمیدی pjet1.2 و متعاقبا در pet28a(+) کلون شد. القای تولید پروتئین با یک میلی مولار iptg صورت گرفت و تخلیص آن با حل کردن اجسام سلولی در اوره، جذب با رزین نیکل، حذف اوره با شیب کاهشی اوره در محلول های شستشو و نهایتا جمع آوری پروتئین نوترکیب به شکل محلول در ایمیدازول انجام شد. حذف ایمیدازول با دیالیز در برابر بافرفسفات نمکی صورت پذیرفت. پروتئین نوترکیب p647-153 با استفاده از آنتی سرم پلی کلونال خرگوشی ضد هموفیلوس آنفلوانزا با استفاده از روش وسترن بلات تایید گردید. یافته ها: پروتئین نوترکیب p647-153 در میزبان e. coli bl21(de3) با موفقیت بیان و تخلیص گردید (حدود 4 میلی گرم درهر لیتر کشت مایع lb ). ساختار آنتیژنی پروتئین نوترکیب p6 نیز با استفاده از ایمونوبلاتینگ تأیید شد. نتیجه گیری: نتایج وسترن بلات به موازات نتایج تعیین توالی، حاکی ازصحت تولید پروتئین p647-153 نوترکیب و حفظ نسبی ساختار اپی توپی آن میباشد.
منابع مشابه
کلون، بیان و تخلیص پروتئین P647-153هموفیلوس آنفلوانزا
زمینه و هدف: همـوفیلوس آنفلوانزا، باسیل گرم منفی است که بخشی از میکروفلور نازوفارنکس را در اغلب افراد تشکیل داده و سویه های مختلف آن در دو گروه کپسولدار (قابل طبقه بندی) و بدون کپسول (غیرقابل طبقه بندی) مورد مطالعه قرار میگیرد. پروتئین غشاء خارجی P6 ، نوعی ایمونوژن حفاظت شده و پایدار درمیان سویههای فاقد کپسول و نیز سویههای کپسولدار هموفیلوس آنفلوانزا میباشد و خود بعنوان کاندید مناسبی جهت ...
متن کاملکلون، بیان، تخلیص و بررسی آنتی‌ژنیسیته نواحی آنتی‌ژنیک پروتئین MOMP کلامیدیا تراکوماتیس
هدف: کلامیدیا تراکوماتیس انگل داخل سلولی اجباری، گرم منفی و یکی از شایع‌ترین عوامل عفونت‌های جنسی میباشد. پروتئین MOMP بیش از 60% پروتئین‌های خارج غشایی را شامل میباشد که نشان‌دهنده اهمیت این پروتئین برای شناسایی باکتری کلامیدیا تراکوماتیس میباشد. هدف از مطالعه، تولید پروتئین نوترکیب متشکل از نواحی آنتی‌ژنیک پروتئین MOMP از ژن omp1 و بررسی آنتی‌ژنیسیته آن میباشد. مواد و روش‌ها: در این مطال...
متن کاملکلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین SNAP-25
Background & Objectives:Clostridial neurotoxin inhibits neurotransmitter release by selective and specific intracellular proteolysis of synaptosomal associated protein of 25KDa (SNAP-25), synaptobrevin/VAMP-2 and syntaxin. SNAP-25 is one of the components that forms docking complex in synaptic ends. This protein is subtrate for botulinum neurotoxins types A,C, and E. Each of these toxin serotyp...
متن کاملکلون، بیان و تخلیص پروتئین سطحی ۳۶ کیلو دالتونی نوترکیب(omp۲b) بروسلا آبورتوس
زمینه و هدف: بروسلوز یکی از مهم ترین بیماری های زئونوز بوده که منجر به ضررهای اقتصادی فراوانی می شود. گونه بروسلا، باکتری های کوکوباسیل گرم منفی داخل سلولی هستند که قادر به تکثیر در فاگوزوم های ماکروفاژها می باشند و در بسیاری از گونه های حیوانی و انسان ها بیماری ایجاد می کنند. پیشگیری و تشخیص، هر دو لازمه ریشه کنی این بیماری می باشند. شناسایی و ارزیابی آنتی ژن های متفاوت سلول بروسلا در پیشبرد ب...
متن کاملکلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین snap-۲۵
چکیده زمینه و هدف: سم های عصبی کلستریدیوم آزادسازی نوروترانسمیترها را به وسیله ی پروتئولیز اختصاصی و انتخابی snap-25 ، سیناپتوبروین vamp و سینتاکسین، مهار می کنند. پروتئین snap-25 یکی از پروتئین های تشکیل دهنده ی مجموعه ی لنگراندازی (docking complex) در پایانه های عصبی است. این پروتئین سوبسترای سم عصبی بوتولینوم، سروتیپ های a ،c و e می باشد. هر کدام از این سروتیپ ها به طور اختصاصی و در جایگاه و...
متن کاملکلون، بیان، تخلیص و بررسی آنتی ژنیسیته نواحی آنتی ژنیک پروتئین vaca هلیکوباکتر پیلوری
زمینه و هدف: هلیکوباکتر پیلوری شایع ترین باکتری است که جوامع انسانی را در بعد جهانی مبتلا به عفونت ساخته است. ژن vaca از مهمترین شاخص های بیماری زایی این باکتری می باشد که باعث تشکیل واکوئل های اسیدی در سیتوپلاسم سلول و تخریب سلول های اپیتلیال معده می شود. هدف از این مطالعه بیان بالا و بررسی خواص آنتی ژنیک پروتئین نوترکیب vaca هلیکوباکتر پیلوری در سرم انسان و موش آلوده با هدف طراحی واکسن علیه ه...
15 صفحه اولمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
مجله دانشگاه علوم پزشکی اردبیلجلد ۱۲، شماره ۴، صفحات ۴۰۸-۴۱۷
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023